提取膠原蛋白的大概過程是去除油脂,去除雜蛋白,膠原蛋白析出,純化等。它的提取方法有以下幾種:熱水提取法,酸提取法,堿提取和酶提取法。
1.熱水提取法
熱水提取法是將原料經過除雜蛋白等前處理之后,直接在熱水中提取已經變性了的膠原蛋白或膠原蛋白水解物的方法,使用的溫度有100℃沸水浴、60-70℃、40-42℃、45℃。
2.酸提取法
酸提取法常用的酸有:甲酸、乙酸、鹽酸、草酸、檸檬酸、乳酸等。低離子濃度酸可以破壞分子間鹽鍵和希夫氏堿,引起膠原纖維膨脹、溶解。
使用酸提取膠原時,根據酸濃度、水解溫度、水解時間等條件的不同,可以得到分子量不均的膠原水解物。但是在等濃度酸*水解過程中*會全部被破壞,*和*也會部分被破壞。因此,酸法溶出生物醫用膠原要準確控制酸度、溫度、時間等影響因素。
3.堿提取法
堿提取通常使用氫氧化鈉,碳酸鈉等,堿性條件下提取膠原,易引起蛋白質變性,如膠原肽鍵水解,含羥基、疏基的氨基酸全部被破壞;所得產物等電點pH值較低,天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉變為天冬氨酸和*;如果水解嚴重,則會產生D、L型氨基酸消旋混合物,若D型氨基酸含量高過L 型氨基酸,則會抑制L-型氨基酸的吸收,有些D型氨基酸有毒,有的甚至有致癌、致畸和致突變的作用。因此,在提取結構完整、使用安全的膠原時,很少采用堿法提取膠原。
4.酶提取法
用蛋白酶處理豬皮,不僅可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽,提高膠原蛋白的產率;而且還不會破壞膠原蛋白的三股螺旋結構,保持其優良的物理和生化特性。通常使用的蛋白酶主要有*、*、無花果蛋白酶、*和*等。影響酶提取的因素有很多,如酶濃度、酶與底物的比例、酶解時間、酶解溫度、pH值以及料液比等。在實際操作中,大多數采用酶復合法提取膠原蛋白。
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