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蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法

時(shí)間:2020/10/14閱讀:121
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()蛋白質(zhì)的鹽析
1.5mL蛋白質(zhì)溶液,加入等體積飽和硫酸銨溶液(濃度為50%飽和),微微搖動(dòng)試管,使溶液混合均勻后,靜置數(shù)分鐘,球蛋白即析出呈絮狀沉淀(如無(wú)沉淀可再加少許飽和硫酸銨),用濾紙濾取上清液,濾液中再加入固體硫酸銨粉末至不再溶解,析出的即為清蛋白,再加水稀釋,觀察沉淀是否溶解。
()蛋白質(zhì)的沉淀
1
.用重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)
取三支試管,各加1mL蛋白質(zhì)溶液,分別各加36%醋酸鉛溶液、32%硫酸銅溶液和31%*溶液,觀察蛋白質(zhì)沉淀的析出。
2
.用有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)
取支試管,各加1mL蛋白質(zhì)溶液,并加5%醋酸溶液使之呈酸性(該沉淀反應(yīng)好在弱酸中進(jìn)行)。然后分別滴加飽和、飽鞣酸溶液,直至沉淀產(chǎn)生為止。
10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液進(jìn)行類似實(shí)驗(yàn)(用量同前),觀察現(xiàn)象。
(三)蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)
1
.黃蛋白反應(yīng)
于試管中,加1mL蛋白質(zhì)溶液和10滴濃硝酸溶液,直火加熱煮沸,觀察溶液和沉淀顏色。冷卻后,再加入2010%氫氯化鈉溶液,觀察顏色變化。
 2.與茚三酮的反應(yīng)
在支試管中,分別加1%賴氨酸溶液和1mL蛋白質(zhì)溶液,分別加2滴茚三酮溶液,加熱至沸,觀察有什么現(xiàn)象?
 3.與試劑作用——米倫反應(yīng)
在支試管中,分別加1mL 0.5%*溶液和1mL蛋白質(zhì)溶液,再各加0.5mL米倫試劑(不可太多),*溶液出現(xiàn)玫瑰紅色,而蛋白質(zhì)溶液加熱后出現(xiàn)沉淀,加熱凝固的蛋白質(zhì)呈磚紅色,有時(shí)溶液也呈紅色。
 4.蛋白質(zhì)的雙縮脲反應(yīng)
 (1) 雙縮脲的生成
于干燥試管中,加0.2g0.3g尿素,微火加熱,尿素熔化并形成雙縮脲,放出的氨可用紅色石蕊試紙?jiān)囼?yàn)。試管內(nèi)有白色固體出現(xiàn)后,停止加熱。
 (2) 雙縮脲反應(yīng)
上述產(chǎn)物冷卻后,加1mL10%氫氧化鈉溶液,搖勻,再加22%硫酸酮溶液,混勻,觀察有無(wú)紫色出現(xiàn)。
于試管中,加1mL清蛋白溶液和1mL10%氫氧化銅溶液,再加1滴~22%硫酸銅溶液共熱,由于蛋白質(zhì)與硫酸銅生成絡(luò)合物而呈紫色。取1%賴氨酸溶液作對(duì)照,觀察顏色變化。
(
) 核蛋白組成的鑒定
 1.核蛋白的水解
20mL酵母核蛋白混懸液于離心管中離心分離,棄去清液,將沉淀轉(zhuǎn)入小燒杯中,加15mL 5%硫酸,蓋上表面皿在水浴上煮沸約1h(煮沸過(guò)程中保持原有體積),水解畢,離心分離,取上層清液作以下檢查。
 2.核糖的鑒定
于試管中,加1mL 20%間*鹽酸溶液,以小火加熱至沸,迅速加入5滴水解液,呈現(xiàn)紅色,(如紅色不顯可再稍加熱)。
 3.磷酸的鑒定
10滴水解液,置于試管中,加57%鉬酸銨溶液和2滴濃硝酸溶液,小心于火上加熱,即有黃色沉淀生成。
4
.嘌呤與嘧啶的鑒定
取約4mL水解液,置于小燒杯中,加入氨水至微堿性,過(guò)濾,在濾液中加1mL 5%*銨溶液,靜置片刻,即有絮狀的嘌呤或嘧啶銀鹽沉淀生成。
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