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高速逆流色譜是一種液-液色譜技術，固定相與流動相都是液體，不需要固態載體支撐。雖然這讓高速逆流色譜有了沒有不可逆吸附、無污染、樣品無損失等特點，但是也讓固定相的液體在色譜柱中的保留程度對分離過程有非常大的影響。因此操作人員需要掌握影響固定相保留率的因素。固定相保留率的影響因素有以下幾點：
1.溶劑體系
所選擇的溶劑體系對固定相保留率有很大的影響，如兩相密度差、粘度、界面張力等。通過研究表明，兩相的密度差對固定相保留率的影響大，固定相保留率和密度差基本呈線性關系。
2.螺旋管柱的轉速
螺旋管柱的轉速以及它產生的離心力場對兩相的混合程度具有決定性的影響。因此，對于界面張力較高的溶劑系統，應使用較高的轉速，以使兩相之間能夠劇烈的混合，從而促進分配和減少質點傳遞的阻力。對于界面張力較低的溶劑系統，應使用較低的轉速，以避免過分混合引起的乳化作用，以及固定相流失的問題。
3.流動相流速方面
固定相保留率和流速平方根之間具有線性關系。
4.儀器的柱溫
儀器的柱溫對于親水性強的正丁醇溶劑體系的固定相保留率影響較大，升溫能改變溶劑的粘度，進而影響兩相的分層時間。在50℃~60℃時，正丁醇體系的分層時間短，在該溫度下可以改善固定相的保留率。然而，對于大部分的疏水性溶劑體系，由于兩相分層快，柱溫升高后兩相分層時間縮短不明顯，因而對改善保留率的效果不明顯。
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