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超高效液相色譜UPLC在中藥分析中的應(yīng)用

來源:上海隱智科學(xué)儀器有限公司   2023年03月01日 09:57  

超高效液相色譜UPLC使得藥學(xué)工作者可以在更短的時間、更高的色譜分離度、更少的溶劑消耗下對中藥復(fù)雜樣品進行分析測定。UPLC在中藥的化學(xué)成分識別、指紋圖譜及代謝組學(xué)等分析領(lǐng)域逐步得到了應(yīng)用,促進了中藥的質(zhì)量評控。


超高效液相色譜UPLC與不同檢測器聯(lián)用在中藥分析中的應(yīng)用


1. UPLC與UV、ELSD聯(lián)用在中藥指紋圖譜與定量分析中的應(yīng)用


超高效液相色譜UPLC與不同檢測器聯(lián)用,可以對含不同化學(xué)類型的中藥進行研究,尤其是結(jié)合指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評價中顯示出了亮眼的優(yōu)勢。比較土茯苓藥材的UPLC-UV和HPLC-UV指紋圖譜,結(jié)果顯示HPLC需要75 min才能完成分析,而UPLC在10 min內(nèi)完成了色譜分離,大大節(jié)省了分析時間。采用UPLC-UV法對大黃中5種蒽醌衍生物進行分析測定,結(jié)果顯示HPLC需要30min才能完成分析,而UPLC在3min內(nèi)即完成色譜分離,分析效率提高了10倍。針對HPLC難以分離的紅參類藥材,開展了基于UPLC-UV的紅參研究,得到了高分離度和高純度的色譜指紋圖譜,該研究建立的方法具有專屬性強、分離度高、色譜峰純度高的特點,可用于人參類藥材的品種鑒定和質(zhì)量控制。


針對一些含皂苷類或化學(xué)成分無紫外吸收的中藥,UPLC-ELSD則優(yōu)勢盡顯。采用UPLC-UV-ELSD法對6個產(chǎn)地28個批次西洋參藥材的指紋圖譜進行聚類分析、主成分分析及相似度評價等研究,為西洋參藥材的品質(zhì)評價提供了參考方法。建立了UPLC-ESLD法同時測定北柴胡藥材中柴胡皂苷a、c、d的含量,是評價北柴胡藥材質(zhì)量的一種較好的方法。建立超聲輔助固液萃取與UPLC-ELSD相結(jié)合同時提取和測定天然牛黃和替代品中6種膽汁酸含量的方法,測定結(jié)果顯示,這些樣品的內(nèi)在質(zhì)量存在一定差異。利用UPLC-ELSD指紋圖譜分析和測定生物堿來研究貝母硫熏蒸過程的潛在破壞作用,該研究表明硫熏蒸對樣品中的主要活性成分損失較大。


2. UPLC與UV、ELSD聯(lián)用在中成藥指紋圖譜與定量分析中的應(yīng)用


由于中成藥的化學(xué)成分比單味藥材的化學(xué)成分更加復(fù)雜,常規(guī)HPLC往往在較短的時間內(nèi)很難獲得分離度較高的色譜圖,超高效液相色譜UPLC的高分離度幫助藥學(xué)工作者可以更好地應(yīng)對分離中成藥中復(fù)雜成分的挑戰(zhàn)。利用UPLC-UV對益*草顆粒和益*草膏中的益母草堿進行了含量測定,進一步完善了益母草制劑的質(zhì)量控制方法。運用UPLC-UV對葛根芩連湯中11種成分進行了含量測定,結(jié)果表明新建立的質(zhì)控方法具有更好的質(zhì)量評控力。運用UPLC-UV比較了三七原料藥和顆粒劑中5種成分的含量差異,定性、定量地評價了三七不同產(chǎn)品的質(zhì)量信息,獲得比較滿意的結(jié)果。建立UPLC-DAD-ELSD切換波長法并應(yīng)用于酸棗仁顆粒中8種成分的含量測定,對酸棗仁顆粒的質(zhì)量控制評價提供了參考方法。利用UPLC-UV建立了復(fù)方芪麻膠囊的指紋圖譜,并定量測定了8種成分,建立了該制劑一種比較全面的質(zhì)量評價方法。利用UPLC-UV建立了葛*芩*丸的指紋圖譜及7種成分的定量測定方法,與之前單一質(zhì)控標準相比,提升了其質(zhì)量控制水平。


3. UPLC與MS聯(lián)用在中藥/中成藥成分辨識中的應(yīng)用


超高效液相色譜UPLC與質(zhì)譜(mass spectrometer,MS)檢測器聯(lián)用可以改善質(zhì)譜檢測結(jié)果的質(zhì)量。由于低流速下色譜峰擴散較小,增加了峰濃度,有利于提高離子源的效率。同時UPLC強大的分離能力有助于目標化合物和與之競爭電離的雜質(zhì)峰的分離,從而使MS的靈敏度由于離子抑制現(xiàn)象的減弱而得到進一步的提高。故UPLC與MS聯(lián)用可以獲得靈敏度更高、質(zhì)量更好的信息,在提高分離效能、縮短分析時間的同時大大提高了檢測靈敏度,有利于中藥或中成藥中復(fù)雜成分的分析。


運用UPLC-Q-TOF-MS快速分析了人參根中的皂苷類化合物,共鑒定出27種化合物,新建立的方法成功地應(yīng)用于分析同一產(chǎn)地、不同生長時間的人參干燥主根中皂苷的差異。運用UPLC-Q-TOF-MS對未加工和加工的黃連進行了化學(xué)成分分析,共鑒定出了13種化合物,其中有3種是初檢測出,結(jié)合主成分分析結(jié)果表明2種不同加工方式的黃連化學(xué)成分存在顯著差異。在參*扶正注*液中運用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS分離鑒定了81個主要成分,包括有機酸、氨基酸、寡糖和生物堿等,為該制劑的質(zhì)量評控奠定了基礎(chǔ)。建立了HPLC-Q-TOF-MS快速鑒定三葉青化學(xué)成分的方法,并用UPLC-Q-MS測定三葉青中4種成分的含量,結(jié)果表明建立的UPLC-Q-MS定量分析方法快捷、準確,為綜合評價三葉青的質(zhì)量提供參考。運用UPLC- DAD-Q-TOF-MS對連**瘟膠囊的主要成分進行定性、定量分析,通過比較保留時間和精確質(zhì)量測定及參考化合物或文獻數(shù)據(jù),初步確定了包括類黃酮、苯丙素類、蒽醌類、三萜類等61種化合物。運用UPLC-Q-TOF-MS分析了不同產(chǎn)地泥附子的化學(xué)成分差異,為從次生代謝產(chǎn)物多樣性揭示附子道地性的形成機制提供了新的參考。運用UPLC-Q-TOF-MS對3種不同種類升麻的化學(xué)成分進行快速分析,共鑒定出32種共有組分以及8種不同成分,為進一步研究3個不同品種的升麻提供了參考。運用UPLC-TQ-MS法研究了丹*軟膠囊中不同活性成分的溶出規(guī)律,為該中成藥的質(zhì)量評控提供了參考。


4. UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學(xué)分析中的應(yīng)用


代謝組學(xué)是目前研究中藥藥理作用機制和發(fā)現(xiàn)活性成分的手段之一,UPLC-MS技術(shù)為中藥代謝組學(xué)分析提供了技術(shù)平臺。超高效液相色譜UPLC可與多種類型的質(zhì)譜串聯(lián),高分辨質(zhì)譜包括飛行時間(TOF)、四極桿-飛行時間(Q-TOF)、串聯(lián)飛行時間(TOF-TOF)及離子阱-飛行時間(IT-TOF)質(zhì)譜等。UPLC與高分辨質(zhì)譜串聯(lián)可應(yīng)用于中草藥非靶向代謝組學(xué)的研究,尤其是UPLC-Q-TOF/MS能夠更好地用于代謝物和同分異構(gòu)體的分離鑒定。此外,UPLC還可與三重四級桿或四極桿離子阱(Q-IT)等串聯(lián)應(yīng)用于中藥靶向代謝組學(xué)分析。目前,新型的串聯(lián)質(zhì)譜如四極桿線性離子阱(Q-Trap)質(zhì)譜由于具有較強的定性和定量能力,與UPLC聯(lián)用在中藥非靶向代謝組學(xué)及靶向代謝組學(xué)方面逐漸得到應(yīng)用。研究嶺南山竹子Garcinia oblongifoliaChamp.ex Benth. 的葉、枝和果實的比較代謝譜和生物活性,使用UPLC-Q-TOF/MS共鑒定了40種化合物,結(jié)合化學(xué)計量學(xué)分析,揭示了所研究的3種植物代謝物譜的變化和生物活性差異相關(guān)聯(lián),表明UPLC-Q-TOF/MS可用于鑒定在單個物種的不同部位中差異表達的生物活性成分。提出了一種基于目標糖組學(xué)和非靶向代謝組學(xué)策略的綜合色譜技術(shù),利用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS同時分離鑒定地黃的碳水化合物和次級代謝物取得了成功,并進一步闡明了碳水化合物和次級代謝產(chǎn)物的化學(xué)轉(zhuǎn)化機制,從而揭示了碳水化合物和次生代謝產(chǎn)物之間固有的化學(xué)聯(lián)系。利用UPLC-MS背景扣除法聯(lián)合代謝組學(xué)技術(shù)研究了柴胡-白芍藥對配伍前后化學(xué)成分的整體變化情況,從整體化學(xué)組成上比較了柴胡-白芍藥對配伍前后的差異,為其配伍機制的闡釋奠定了基礎(chǔ)。利用基于超高效液相色譜/電噴霧電離synapt高清質(zhì)譜(UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS)結(jié)合模式識別方法研究了酸棗仁湯治療失眠癥的代謝特征和治療效果,鑒定出20種離子作為“分化代謝物”,結(jié)果表明酸棗仁湯的治療效果可能通過5-羥色胺能激活介導(dǎo)實現(xiàn),該研究結(jié)果還表明UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS技術(shù)可用于中藥的代謝物分析,開辟了使用代謝組學(xué)解決特殊中藥問題的新視角。利用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技術(shù)對復(fù)方祖*麻片抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的血漿代謝組學(xué)進行研究,結(jié)果表明復(fù)方祖*麻片主要通過下調(diào)繼發(fā)性病變期溶血磷脂酰*堿的水平而達到治療效果。


由于樣品組分的分離在先,離子化和檢測在后,因而能夠有效地減少干擾,諸如基質(zhì)效應(yīng)、離子化抑制、離子化競爭等,大幅度增加代謝物的鑒別數(shù)量和準確度。UPLC-MS除了分析速度快、樣品無需衍生化等優(yōu)點,UPLC的高分離度使得峰寬變窄、信噪比增強,從而提高了生物樣品分析的選擇性和靈敏度。因此,與傳統(tǒng)HPLC相比,UPLC能獲得中藥更多代謝物的信息,對于復(fù)雜生物樣品的分離具有顯著優(yōu)勢,UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學(xué)研究中將發(fā)揮越來越重要的作用。


5. UPLC與MS聯(lián)用在中藥真菌毒素分析中的應(yīng)用


目前中藥的安全性檢測受到越來越多的關(guān)注和研究,但是中藥含有真菌毒素往往是微量(1~100 μg/g)、痕量(0.01~1 μg/g)級別,常規(guī)分析手段往往很難到達檢測限和定量限。超高效液相色譜UPLC與MS聯(lián)用帶來的高靈敏度幫助藥學(xué)工作者可以很好地定量分析中藥中的真菌毒素。建立了一種基于QuEChERS-UPLC-Q-MS/MS法定量測定白茅根中16種真菌毒素,充分利用UPLC的高分離度,獲得了較好的結(jié)果。建立了UPLC-MS/MS法同時測定麥芽中11種真菌毒素的污染水平,通過相同保留時間處的特征離子二級碎片排除了假陽性結(jié)果,檢測限和定量限分別為0.05~30.00 μg/kg和0.15~87.50 μg/kg,表明該方法可以準確、靈敏、快速地監(jiān)測麥芽受真菌毒素污染的狀況。使用UHPLC-MS/MS法測定淡豆豉、麥芽、薏苡仁和酸棗仁中黃曲霉毒素的含量,結(jié)果顯示不同藥材的黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1的檢出限分別為0.04~0.1 μg/kg、0.01~0.02 μg/kg、0.01~0.03 μg/kg和0.02~0.03 μg/kg,表明了該方法具有較高的靈敏度。采用UPLC-MS/MS法對三七、黨參和柴胡中的黃曲霉毒素進行了檢測,該研究表明分離條件對分離結(jié)果有一定影響,3種藥材中曲霉屬真菌的污染值應(yīng)得到重視。建立了一種基于ESI-LC/MS同時檢測三七藥材中10 種真菌毒素方法,結(jié)果表明該方法凈化效果好、靈敏度高、重復(fù)性好,適用于成分復(fù)雜的三七藥材中多種真菌毒素的定量檢測。對決明子、菟絲子、薏苡仁等12種藥材種子中黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1和赭*霉*素A進行了測定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭*霉*素A在12種藥材種子中的檢出率較低,但一旦檢測到即為高水平。實現(xiàn)快速、準確地同時測定多種真菌毒素一直是中草藥分析領(lǐng)域的熱點和難點,UPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)將會越來越多地應(yīng)用于中藥的真菌毒素分析。


在實際應(yīng)用中由于UPLC使用的色譜柱柱填料較小,為防止堵塞,樣品前處理要求更加嚴格。超高效液相色譜UPLC是在HPLC的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,由于UPLC能夠提高色譜分離度、縮短分析時間、提高分析效率、節(jié)省溶劑消耗,同時提供智能化的分析,確保分析數(shù)據(jù)的可靠性和高效率,因此將成為中藥分析領(lǐng)域的主要分析手段,其應(yīng)用將會越來越多。



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