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簡單的總結和收集了一些關于細胞培養中，常出現的些技術問題，希望對大家有幫助：

1. 液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？
  要冷藏！！因為液體培養基經冷凍后再經溶化時，其溶液的pH值會發生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。

2. 液體培養基中*的作用，及使用方法。
  幾乎所有的細胞對*有較高的要求，細胞需要*合成蛋白質，在缺少*時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的*。*在溶液中很不穩定，應置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養基中。加有*的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的*。基礎醫學細胞中心在其服務項目中配制分裝了高濃度（100倍）的*溶液（1ml/支）。每支1ml的*加到99ml*培養基中，其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色，-24?C保存。

3.培養用液pH對細胞生長的影響
   由于，大多數細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。
但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環境中更利于細胞生長。因此，我們在配制培養用液時，可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

4．原代培養和傳代培養的概念

從機體上獲取的組織，通過酶或機械方法分散成單個細胞進行培養，在傳代前的培養一般稱為原代培養。原代培養的zui大優點是：組織細胞剛脫離機體，生物性狀尚未發生較大變化，在一定程度上能夠反映體內的狀態。原代培養的細胞在生長、繁殖一定時間后，由于空間不足或細胞密度過大導致營養枯竭，會影響細胞的生長，因此需要進行擴大培養，即傳代或稱為傳代培養，也就是將細胞按1：2~1：4的比例傳代。但嚴格說來，不論在進行傳代時稀釋與否，將細胞從一個培養瓶轉移到另一個培養瓶即稱為傳代培養。

傳代代數與細胞的世代（增殖代數）并不是同一個概念。在細胞培養時，所說的“第10代細胞”，僅指該細胞已經傳代10次；細胞傳一代后，一般能倍增3~6次，經過三個階段，即潛伏期、指數生長期和平臺期。當細胞達到平臺期時，就需要進行傳代培養，否則細胞會中毒，發生形態改變，甚至死亡。

5．關于傳代培養

在進行傳代時，如果是懸浮細胞，只需簡單稀釋即可，若需*更換培養液只需低速離心沉淀，再懸浮于合適的培養液中即可。一般細胞每毫升接種數量為5´10⁴~8´10⁵個，傳代密度太低，細胞容易死亡，表現出細胞在達到增長前有較長的滯留期。在培養過程中，培養液會由于pH下降而呈現黃色，表明細胞已經達到zui大密度需要換液或進行傳代培養。如果是單層貼壁的細胞，等長滿培養瓶表面，即可進行傳代，多數細胞需用*處理將細胞從生長物表面分離下來，以促進傳代培養。

6．細胞系和細胞株

細胞系和細胞株，兩者曾一度混用，導致有些文獻中概念不清。下面所指的概念是現在國內外比較通用的，也是絕大多數研究者接受的觀點。

原代培養物經傳代成功即稱為細胞系（Cell Line），因此細胞系可泛指一般可能傳代的細胞。其中能夠連續傳代的細胞叫做連續細胞系或無限細胞系，不能連續培養的稱為有限細胞系。大多數二倍體細胞為有限細胞系。通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株（Cell Strain），也就是說，細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。

7。細胞培養環境要求：

無污染環境：培養環境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養時，與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身 代謝物質積累等，可導致細胞死亡。因此在進行培養中，保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

恒定的溫度：維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養的標準溫度為 36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與 溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數有可能恢 復；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能；當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。

氣體環境：氣體是人體細胞培養生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環，產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的 各種成分。 開放培養時一般把細胞置于 95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。