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　　【中國儀器網 產品文庫】近年來，酶標儀在臨床實驗室中的應用越來越普及，使得酶免疫分析法(EIA)的自動化程度及性愈來愈高，尤其是近幾年，進口的、國產的單、多通道全自動酶標儀的種類及型號發展非常迅猛，是臨床實驗室自動化程度繼生化分析儀、血細胞計數儀、*等之后的又一次更新和提高。
 

酶標儀
 

　　然而，國內外有關酶標儀性能系統評價的方法甚少，有的評價指標簡單且不全面，有的對其性能評價所采用的方法不盡一致，導致不同儀器之間、廠家與用戶之間、用戶與用戶之間的評價指標缺乏可比性，這是由于酶標儀在制造工藝(多通道檢測器)、測定原理(垂直光路光度測定法)與其它水平光路光度測定的儀器(721分光光度計)之間存在著很大的差別。因此，我們對國內外幾個不同廠家和型號的儀器經過系統研究論證，初步建立了一套較為完善的酶標儀性能評價指標與鑒定的基本方法。經初步應用，效果滿意，應廣大讀者和用戶的要求，擬將酶標儀性能評價與鑒定方法的理論及其原理作一介紹和補充，以供同行在評價、鑒定和使用儀器時參考，從而為進一步提高檢測結果的室內重復性和室間可比性提供可靠的保證。
 

　　1.方法與原理
 

　　1.1濾光片波長精度檢查及其峰值測定
 

　　1.1.1方法及其衡量的標準：用高精度紫外可見分光光度計(波長精度±0.3nm)對不同波長的濾光片進行光譜掃描，檢測值與標定值之差即為濾光片波長精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質量越好，波長精度越高。
 

　　1.1.2理論基礎：酶標儀的濾光片質量好壞，直接影響儀器的靈敏度高低，而濾光片的質量又是以其波長精度及其峰值指標來衡量的，因此濾光片波長精度及峰值是衡量酶標儀的重要參數之一，這在廠家的儀器說明書中雖未曾提及，但在儀器的實際使用過程中，我們發現對濾光片波長精度和峰值進行檢查是重要的也是必要的，通過檢查可以發現濾光片的波長標定值與實測值的符合程度，可以發現濾光片的質量是否符合要求。
 

　　1.2靈敏度和準確度的監測
 

　　1.2.1方法：①靈敏度：配制6ug/ml重鉻酸鉀(干燥)溶液(0.05mo1/L硫酸溶解)，加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中，以0.05mo1/L硫酸溶液作空白，于450nm(參比波長650nm)測定，其吸光度應≥0.01
 

　　A。②準確度：準確配制：1mmo/L對硝基*(提純品)水溶液，然后以10mmo1/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之，加入200ul稀釋液于小孔杯中，以10mmo1/LNaOH溶液作空白，于405nm(參比波長650nm)檢測，其吸光度應在0.4A(0.395～0.408A)左右。
 

　　1.2.2說明：儀器的靈敏度和準確度主要受兩個因素影響：一是濾光片波長的精度，二是檢測器的質量。通常情況下，濾光片原因導致儀器的靈敏度和準確度下降比較容易檢查；而檢測器質量差異則不易被發現，因此我們采用上述兩種標準物質溶液對儀器檢測器的質量進行定期監測，從而保證了儀器檢測結果的可靠性。對于儀器準確性的測定，我們采用了文獻報道的方法，經過多次在不同型號儀器間進行反復測定，結果發現該標準物溶液在450nm波長處有一較為恒定的測定值，由于酶標儀與其它分光光度計的光學原理不*相同，故是否可以作為評價酶標儀準確性的參考方法還有待同行進一步研究考證。
 

　　1.3通道差與孔間差檢測
 

　　1.3.1方法及其表達方式：①通道差檢測：取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染)以酶標板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200u*后置于8個通道的相應位置，蒸餾水調零，采用雙波長(測定波長490nm，參比波長630或650nm，以下均相同)連續測三次，觀察其不同通道之間測量結果的一致性可用極差值來表示其通道差。②孔間差的測量：選擇同一廠家、同一批號酶標板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調至0.065～0.070A)先后置于同一通道，蒸餾水調零，采用雙波長檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。
 

　　1.3.2理論解釋：為了提高酶標儀的檢測速度，根據96孔酶標板的規格特點，目前大多數廠家的中、酶標儀均采用8通道的檢測器(部分中、低檔酶標儀目前仍采用單通道).因而它們每個通道的檢測能力是不盡相同的，它是儀器內部的固有誤差，與所測溶液濃度成正相關(不同檢測器對不同濃度溶液的響應能力不同)，所以通道差是衡量酶標儀性能良好與否的重要指標之一；其衡量指標用極差表示，這與廠家推薦的指標是一致的；極差值越接近于零，通道差越小，說明同一樣品于不同通道檢測結果的一致性越好。
 

　　由于不同廠家、不同批號酶標板之間的質量差異，導致孔與孔之間的檢測結果也不*一致，這與水平光路光度計的比色皿質量是否符合要求一樣，因此我們認為孔間差是儀器外部的固有誤差，只有準確測知孔間差，并對結果作出相應的校正，才能使檢驗結果更符合實際情況、更準確可靠；采用的評價指標(士1.96s)也是有利于結果校正的。另外，在設計孔間差測量的操作方法上，我們將200ul甲基橙溶液吸光度調至0.065～0.070A，是充分考慮到加樣器的誤差(上海求精公司，200ul，士2%CV)，其目的是使加樣誤差控制在儀器的分辨率(0.01A)以下，這樣也就避免了孔間差結果不因加樣誤差而導致假性增高。
 

　　1.4零點飄移
 

　　1.4.1方法：取八只小孔杯，分別置于八個通道的相應位置，均加入200ul蒸餾水并調零，采用雙波長或單波長(490nm)每隔30min測定一次，觀察8個通道4h內的吸光度變化。其與零點的差值即為零點飄移。
 

　　1.4.2測量原理：酶標儀的零點飄移通常是很小的，這是由于儀器在讀數之前，先要做8個通道的本底測量(Io).然后再讀取樣品板的各孔測定值(I)，根據Beer'slaw光吸收值=1ogl0(Io/I)，每次讀數經過如此的自動校正，使得讀數誤差大大降低，這樣的測讀方式無疑是非常正確的的；另外有的儀器是應用"DRLDYE"檢測試條來進行吸光度的校準的，因此在采用單波長測量時，會導致吸光度的假性增高，這種儀器可采取兩種方法進行校正，一是選擇一合適的參比濾光片進行雙波長測定，二是引入修正參數，即在吸光度模式下單波長讀取1個空白孔，其測試值和預測值之差值即為修正參數。所以零點飄移是評價儀器在一定時間內零點吸光度的變化趨勢，與波長無關，它間接地反映了儀器內部檢測系統在單位時間內處于工作狀態下的穩定性及儀器的機械性能情況(連續進板、檢測、退出)，故它是評估儀器內部電路系統、光學系統(檢測器)及機械系統良好與否的指標。
 

　　1.5精密度評價
 

　　1.5.1方法及評價指標：每個通道三只小杯，分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調零，采用雙波長作雙份平行測定，每日測定兩次，連續測定20天。分別計算其批內精密度、日內批間精密度、日間精密度和總精密度及相應的CV值。
 

　　1.5.2理論依據：1984年美國臨床實驗室標準委員會發表了EP5一T文件并于1992年進行了第二次修訂：臨床化學儀器精密度性能的用戶評價。該評價方案在生化分析儀、血細胞計數儀等儀器和試劑的評價中得到了廣泛的應用，使評價儀器的方法得到了統一；而該法應用于酶標儀的評價在國內外則尚未見有類似的報道，我們采用該法對酶標儀進行系統評價，結果是比較滿意的。各指標的意義為：批內精密度系由20d中每天兩批，每批兩次之差(即"批內")經統計學處理后所得的結果；日內批間精密度系由20d中每天兩批測定結果均值之差(即"批間")經統計學處理后所得的結果；日間精密度表示20d中每天所測均值的標準差即標準誤，反映了每日均值的離散度；總精密度則是對批內、批間和日間精密度進行加權統計的結果。其中以批內精密度和總精密度的應用，與傳統的批內精密度的計算方法(即對同一標本在同一天內同時重復測定多次)相比，前者更符合實驗室的實際情況，更有代表性，也更加合理；而總精密度則客觀地全面地反映了實驗室的總體變異情況。
 

　　1.6線性測定
 

　　1.6.1方法：稱取甲基橙配制5個系列濃度的溶液，采用雙波長平行檢測8次求其均值。計算回歸方程、相關系數r及標準估計誤差Sy,x，并用±1.96Sy,x表示樣品的95%測量范圍。
 

　　1.6.2評價指標解釋：線性測定也是評價儀器的重要手段之一，因為它是儀器開展定量工作的基礎和前提，某些廠家用標準估計誤差s來衡量線性，這與實驗室通常所采用的相關系數r是一致的，因此在進行線性評估時，我們同時報告r和Sy,x，目的是為了增強用戶與廠家之間的可比性。
 

　　1.7雙波長評價
 

　　1.7.1方法：在運用酶標儀檢測樣品時，由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等，這些都是儀器測定過程中zui常見的干擾因素，而標本中的干擾組份(如溶血、黃道)因洗滌而對測定結果影響則較小，因此我們將文獻中的雙被長評價方法改為：取同一廠、同一批號酶標板條(每個通道2條共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度調至0.065～0.070A)先后于8個通道分別采用單波長(490nm)和雙波長(測定波長490nm、參比波長630/650nm)進行檢測，計算單波長和雙波長測定結果的均值、離散度，比較各組之間是否具有統計學差異以考察雙波長清除干擾因素的效果。
 

　　1.7.2說明：雙波長測定過程中，由于標本中干擾組份的存在以及小孔杯本身質量等原因，常常導致測定結果的假性增高，而酶標儀提供的雙波長測定功能則可以消除干擾組份或因素對測定結果的影響.對于標本中干擾組份的清除，在選擇參比波長時，我們應對于擾組份的光譜進行研究，以正確選擇參比波長；而對于小孔杯本身質量問題等干擾因素的消除，只要選擇遠離測定波長的參比波長即可以了、這對保證測定結果的準確性是非常重要的。
 

　　2.小結
 

　　2.1目前，國內外有關酶標儀性能評價與鑒定方法的報道尚不多見，由于酶標儀在臨床實驗室中的應用越來越普及，因而，建立一套完善的酶標儀性能評價方法并對儀器進行全面的較為系統的綜合評價乃是臨床實驗室工作人員的當務之急，這對進一步增強儀器之間的可比性和保證ELA法的工作質量是至關重要的，同時將其評價指標引入到檢測結果的校正工作中，合理地作出各個定性試驗項目的可信限與界值，對正確判讀結果和開展定量檢測工作具有一定的指導意義。
 

　　2.2在對酶標儀進行評估時，還應對儀器的自動化程度及售后服務有一個比較全面的了解。自動化程度如儀器的分辨率(一般為0.001A)、報告的方式(通常提供4～6種以上的格式)、可提供濾光片的zui大數目(有些廠家可根據用戶要求訂做)、是否提供用戶自編程序及外接微機的功能和軟件等等。
 

　　2.3售后服務也是儀器使用順利與否的根本保證，用戶應當與信譽較好、服務周到、維修方便的代理商進行恰談，以免儀器一旦出現故障，而不致于影響工作或使儀器處于癱瘓狀態不能發揮應有的社會效益和經濟效益。
 

　　2.4另外需要強調的是：由于酶標儀的種類、型號繁多，每個儀器的測量原理也不盡相同，為了保證不同儀器之間測定結果的一致性，我們認為在測定時應采用雙波長法，而且必須采用雙波長，這樣既能消除干擾組份和干擾因素的影響，又能避免因儀器測量原理不同而造成儀器之間結果的不一一致性。