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　　【儀器網(wǎng) 使用手冊】高速逆流色譜法 (High-speed Countercurrent Chromatography，簡稱HSCCC)，于1982年由美國國立衛(wèi)生院Ito博士研制開發(fā)的一種新型的、連續(xù)gao效的液分配色譜技術(shù)，與其它色譜技術(shù)不同的是它不需任何固態(tài)載體，因此能避免固相載體表面與樣品發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致樣品的污染、失活、變性和不可逆吸附等不良影響。同時它也具有適用范圍廣、快速、進(jìn)樣量大、費用低、回收率高等優(yōu)點。因此，己在生物、醫(yī)藥、食品、材料、化妝品和環(huán)保等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用，尤其是在天然產(chǎn)物活性成分的分離純化領(lǐng)域倍受重視。
 

　　1.高速逆流色譜技術(shù)的原理
 

　　高速逆流色譜法是建立在單向性流體動力平衡體系之上的一種逆流色譜分離方法，它是在研究旋轉(zhuǎn)管的流體動力平衡時偶然發(fā)現(xiàn)的。當(dāng)螺旋管在慢速轉(zhuǎn)動時，螺旋管中的兩相都從一端分布到另一端。用某一相作移動相從一端向另一端洗脫時，另一相在螺旋管里的保留值大約50%，但這一保留量會隨著移動相流速的增大而減小，使分離效率降低。但使螺旋管的轉(zhuǎn)速加快時，兩相的分布發(fā)生變化。當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到臨界范圍時，兩相便會沿螺旋管長度*分開，其中一相全部占據(jù)首端的一段，我們稱這一相為首端相，另一段全部占據(jù)尾端的一段，稱為尾端相。高速逆流色譜正是利用了兩相的這種單向性分布特征，在高的螺旋管轉(zhuǎn)動速下，如果從尾端送入首端相，它將穿過尾端相而移向首端，同樣，如果從首端相送入尾相，它將穿過首端相而移向螺旋管的尾端。分離時，在螺旋管內(nèi)首先注入其中的一相(固定相)，然后從合適的一端泵入移動相，讓它載著樣品在螺旋管中無限次的分配。儀器轉(zhuǎn)速越快，固定相保留越多，分離效果越好，且大大地提高了分離速度，故稱高速逆流色譜。
 

　　2.高速逆流色譜色譜儀的基本配置
 

　　儀器的中心部分:(a) ITO多層線圈分離柱，它是由100-200米長、內(nèi)徑為1.6mm左右的聚四氟乙烯管沿具有適當(dāng)內(nèi)徑的內(nèi)軸共繞十多層而成，其管內(nèi)總體積可達(dá)300mL左右。(b)平衡器，它可以調(diào)節(jié)重量，它的作用是讓(a)， (b)相對于中心軸兩邊重量平衡。當(dāng)在旋轉(zhuǎn)控制器的控制下，在齒輪傳動裝置作用下，(a)，(b)同時繞中心軸作順時針或反時針的行星運動，即(a)- (b)本身既在自轉(zhuǎn)，但同時又在繞中心軸公轉(zhuǎn)，公轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速可從0-4000r/min。從線圈分離柱中通過中空的中心軸還同時牽引出了線圈的兩端，一端供泵入液用，一端輸出液體。儀器工作需要互不相溶的兩種液體，一相作固定相，一相作移動相。儀器工作前，先將作為固定相一相的液體通過恒流泵壓入線圈分離柱，然后用進(jìn)樣器將待分離的樣品按如圖所示進(jìn)樣，zui后用恒流泵壓入移動相，同時啟動中心部分運轉(zhuǎn)直到轉(zhuǎn)速大于600r/min。此時，兩相在線圈分離柱中具有相對運動之勢。由于移動相*的壓入，阻止了固定相的流出，同時，移動相帶著樣品在線圈分離柱中進(jìn)行無限次的分配而使復(fù)雜樣品得到分離。當(dāng)移動相經(jīng)過檢測器時，由于不同的樣品組分會產(chǎn)生不同大小的信號，用記錄儀便能得到逆流色譜圖譜，同時用餾分收集器分步收集移動相便會得到復(fù)雜樣品被分開的組分。較大的制備型HSCCC，柱容積可達(dá)530m1，一次zui多進(jìn)樣可達(dá)20g粗品;較小的分析型的HSCCC柱容積為8m1，進(jìn)樣量為幾十微克，zui大轉(zhuǎn)速可達(dá)4000r/min，分析能力堪與HPLC相媲美。
 

　　在常用的HSCCC基礎(chǔ)上，有人提出雙向模式的高速逆流色譜" (dua-mode counter crurrent chromatography簡稱Dccc)，即前一次的流動相作下一次的固定相，洗脫方向相反。與常規(guī)的HSCCC相比，Dccc可以降低制備時間，免去柱沖洗時間，提高分離效率，不必預(yù)測溶質(zhì)的保留時間和分配系數(shù)，減少了溶劑選擇的繁瑣。但目前由于溶劑體系系統(tǒng)不完善，應(yīng)用范圍較窄。