薄層色譜法是用于分離混合物的層析技術,利用覆蓋了很薄一層吸附劑的玻璃板、塑料片或鋁箔上進行混合物的分離。薄層色譜法操作簡單,是一種常用的色譜分離方法,下面就簡單介紹一下薄層色譜法的操作方法
1.薄層板:
有市售薄層板(普通或高效板)和自制薄層板,可根據需要選用。
2.點樣:
通常在潔凈干燥的環境,用毛細管或配合相應的半自動或自動點樣器械將樣品點樣于薄層板上。一般為圓點狀或窄細的條帶狀,點樣基線距底邊10-15mm,高效板一般基線距底邊8- 10mm。圓點狀直徑一般不大3mm,高效板一般不大于2mm。接觸點樣時注意勿損傷薄層板表面。條帶狀寬度一般為5-I0mm,高效板條帶寬度一般為 4- 8mm,可用半自動或自動點樣器械噴霧法點樣。點間距離可視斑點擴散情況以相鄰斑點互不干擾為宜,一般不少于8mm,高效板供試品間隔不少于5mm。
3.展開
將點好供試品的薄層板放入展開缸中,浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜,密閉。除另有規定外,一般上行展開8-15cm,高效薄層板上行展開5 - 8cm。溶劑前沿達到規定的展距,取出薄層板,晾干,待檢測。
4.顯色與檢視
試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視,也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色或加熱顯色,在日光下檢視。有熒光的物質或遇某些試劑可激發熒光的物質可在365nm紫外光燈下觀察熒光色譜。對于可見光下無色,但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板,在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質形成的色譜。
5.記錄
薄層色譜圖像一般可采用攝像設備拍攝,以光學照片或電子圖像的形式保存。也可用薄層掃描儀掃描記錄相應的色譜圖。
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