入秋了,又到了吃棗的季節。棗果不僅是滋補佳品,也是一味傳統的中藥,并且棗中含有多種糖類。糖類是自然界中廣泛分布的一類重要的有機化合物,是一切生命體維持生命活動所需能量的主要來源。
在高效液相色譜儀(HPLC)測試中,糖類的分子通常采用通用型檢測器檢測,如示差折光檢測器(RI)進行檢測。但采用RI檢測器有兩個明顯的缺點:靈敏度低、不能梯度洗脫。采用磷酸-苯肼柱后衍生法測定糖類,可以克服RI檢測器的以上兩個缺點。
下面我們使用日立Chromaster高效液相色譜儀,利用磷酸-苯肼柱后衍生法進行糖類的分析。色譜柱將糖類分離,再與磷酸-苯肼溶液在高溫下反應,使用有選擇性,高靈敏度的熒光檢測器進行檢測,梯度洗脫可以多種糖成分同時分析。此方法克服了示差折光檢測器的靈敏度低和不能梯度洗脫的缺點。
■ 流路圖
儀器配置: Chromaster 5110 泵,5210 自動進樣器,5310 柱溫箱,5410 UV檢測器,5510反應單元
■ 標準品測定例
■ 系統適用性(100 mg/L 糖標準混合液)
分別對硅膠基質和聚合物基質色譜柱的系統適用性進行評價,理論塔板數按蔗糖峰計算,分離度以葡萄糖和半乳糖的分離度計算,結果得到色譜柱的理論塔板數和分離度如上表所示。聚合物基質色譜柱的測定,理論塔板數較低,但色譜柱的壽命較長;硅膠基質色譜柱的測定,色譜峰的峰形尖銳,分離度改善很多。后續實驗均采用硅膠基質色譜柱。
■線性
以半乳糖和蔗糖為例,各種糖成分在10 ~ 500 mg/L標準混合液的濃度范圍內,R2 ≥ 0.9995,線性關系良好。
■ 重現性
■ 棗樣品的分析結果
對大棗樣品進行了糖成分的分析,結果在棗中檢測到果糖、葡萄糖和蔗糖成分,并且均得到很好的分離效果。
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