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返回產品中心>定量蛋白組學實驗外包服務是依據細胞生長對必需氨基酸的依賴原理,利用穩定同位素標記( 13C,15N,2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質組進行代謝標記的方法;13C,15N,2H是穩定同位素,沒有放射性,因此可以在常規條件下進行試驗。
定量蛋白組學實驗外包服務背景簡介:
SILAC( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技術是依據細胞生長對必需氨基酸的依賴原理,利用穩定同位素標記( 13C,15N,2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質組進行代謝標記的方法;13C,15N,2H是穩定同位素,沒有放射性,因此可以在常規條件下進行試驗。
定量蛋白組學實驗外包服務
Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILACzui常用的氨基酸。將(13C,15N,2H)等穩定同位素標記的R、K、L加入細胞培養基中,在細胞進行蛋白質合成時,這些穩定同位素標記的氨基酸自然被“摻入”到蛋白質中。通過>6代的細胞增殖,整個細胞的蛋白質組會被穩定同位素氨基酸”標記”;SILAC“標記”了蛋白質與“未標記”的蛋白質(普通培養基培養)存在一定數目的質量差異,該質量差異在后續LC-MS的一級質譜( MSl)中呈現一對同位素質譜峰,通過質譜峰的信號強度能精確實現對2組樣品中每一個蛋白質表達水平的相對定量,zui終能確定蛋白質表達水平差異(差異蛋白質組學分析)和區分特異性和非特異性相互作用(蛋白質相互作用分析);同時通過二級質譜( MS/MS,MS2)實現對樣品中蛋白質的鑒定。
SILAC技術結合LC-MS能同時實現對2組樣品中蛋白質的定性和定量分析。實驗技術“高、大、上“,定量精確,通過定墨信息能直接反映出樣品之間的蛋白質表達水平差異,便于快速找到感興趣的目標分子。同時,利用SILAC技術,能明顯提高文章的
檔次。
定量蛋白組學實驗外包服務SILAC氨基酸對照表:
SILAC實驗設計:
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