Phos-tag（TM） Agarose Phos-tag 瓊脂糖 用于分離，純化和富集磷酸化蛋白質的全新方法。 這種方法的基礎是金屬固化親和層析（IMAC），使用磷酸結合標記分子（雙核鋅（II）絡合物），該標記分子接在高度交聯(lián)的瓊脂糖上（Phos-tag瓊脂糖）。相關產品貨號 302-93561; 308-93563。

Phos-tag^™ 瓊脂糖 Phos-tag^™ Agarose

Phos-tag^™ Agarose

Phos-tag^™是由廣島大學高分子科學系開發(fā)的一種中性pH環(huán)境(生理pH)下的新型磷酸結合標記。Phos-tag^™ SDS-PAGE這種電泳方法可以同時分析磷酸化蛋白異構體和配對二價錳的非磷酸化蛋白，是一種使用Pho-tag^™瓊脂糖用于分離，純化和富集磷酸化蛋白質的全新方法。 這種方法的基礎是金屬固化親和層析(IMAC)，使用磷酸結合標記分子（雙核鋅(II)絡合物），該標記分子接在高度交聯(lián)的瓊脂糖上（Phos-tag瓊脂糖）。

Phos-tag^™磷酸化親和電泳原理

Phos-tag Agarose特點：

■ 在1小時內純化磷酸化蛋白
■ 所有操作在生理條件下（pH7.5）
■ Phos-tag 瓊脂糖操作過程與常規(guī)親和純化層析相類似
■ 無需還原劑和表面活性劑

Phos-tag ™應用：在A431裂解液中的磷酸化蛋白的純化

M：分子量標記 Lane 1：未吸附層 Lane 2：吸附層 Lane 3：柱清洗層 把Phos-tag™填充到柱里，再加上A431 裂解液。 SYPRO Ruby染色（左圖）再使用Anti-p Tyr抗體進行免疫印跡（右圖），檢測出結果。 結果確認磷酸化蛋白濃縮在柱吸附層里。

Phos-tag ™Agarose 使用注意事項：

1. 當Phos-tag™ 瓊脂糖凝膠床按使用規(guī)范固定在1毫升時，很容易根據樣品的量來優(yōu)化。
在測定緩沖液pH值之前，使用2中不同pH值的緩沖溶液（例如 pH 4和7）對電極進行校正

2. 當大量的裂解液蛋白（例如0.60 mg A431 細胞蛋白，在0.25 mL RIPA緩沖液中)用在1-mL凝膠床, 一部分蛋白會在通過和洗滌時被洗脫出來。使用2倍體積的RIAP緩沖液(例如 0.50 mL, 0.50 mg 裂解液蛋白)和1-mL 凝膠床時會產生一個峰, 可以歸因于由EDTA消除HOVO32- 或zinc(II)-所產生的競爭結合。

3. 部分蛋白在離心過濾時被吸附。請使用蛋白質定量方法（例如Bradford法）估計洗脫出的蛋白質回收率。

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上述產品在2-10°C下保存

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