藻類表型研究全面解決方案（二）

5. 珊瑚共生體的表型研究

Miguel Costa Leal等利用FluorCam封閉式多光譜熒光成像系統，對珊瑚共生體的光合能力及生態變化進行了研究。FluorCam封閉式多光譜熒光成像系統除了進行葉綠素熒光成像測量，還可以進行植被歸一化指數NDVI成像與綠色熒光蛋白GFP成像（也可以測量其他熒光蛋白）。在本研究中，NDVI成像反映其葉綠素的分布及濃度變化，GFP成像則指示了含有GFP類似蛋白的刺胞動物組織，葉綠素熒光成像則展示了珊瑚的光合能力。同時多光譜熒光還可以進行次生代謝組與病害表型研究及其他熒光蛋白成像，如YFP、BFP、RFP等。

因此，僅一臺FluorCam多光譜熒光成像系統就可以完成相當全面的藻類表型研究：光合表型、NDVI反射光譜指數、熒光蛋白、次生代謝水平與分布。

左：珊瑚收縮－膨脹不同時相NDVI多光譜成像與GFP綠色熒光蛋白成像分析；右；珊瑚表面及垂直剖面樣品分別在弱光和強光適應條件下的RGB成像、葉綠素熒光成像和NDVI多光譜成像分析

本研究中定制的FluorCam封閉式多光譜熒光成像系統結構示意圖

參考文獻：Leal M C, et al. 2015. Concurrent imaging of chlorophyll ?uorescence, Chlorophyll a content and green ?uorescent proteins-like proteins of symbiotic cnidarians. Marine Ecology, DOI: 10.1111/maec.12164

6. 生物侵蝕防治的研究

大理石雕像上經常會覆蓋上綠色或黑灰色的生物膜。這種生物膜是藍藻、藻類和真菌的混合體，并會逐漸侵蝕大理石。為了對戶外大理石雕像進行保護，歐洲相關科研機構開展了大量相關的研究工作。而為了評估生物膜的活性以及清洗后的效果，葉綠素熒光成像技術無疑是便捷、直接的技術。意大利弗洛倫薩應用物理研究所的Marta Mascalchi使用激光清除大理石上的生物膜。FluorCam便攜式熒光成像儀為其檢測清除效果并優化激光參數提供了力的數據。

左：通過葉綠素熒光成像圖驗證處理效果；右：工作中的FluorCam便攜式熒光成像儀

參考文獻：Mascalchi M, et al. 2018. Laser removal of biofilm from Carrara marble using 532 nm: The first validation study. Measurement 130: 255-263

7. 生物能源開發

進行藻類產油生物能源開發，首先就是獲得高生物量的優良藻種。非光化學淬滅NPQ代表著藻類光合系統沒有利用而熱耗散掉的能量。那么減小NPQ，勢必能提高其生物量。本研究中使用FluorCam葉綠素熒光成像系統篩選了兩種NPQ減小的衣藻突變株，同時通過MC1000 8通道藻類培養監測系統探索其的培養條件。MC1000 8通道藻類培養監測系統可以認為是FMT150藻類培養與在線監測系統的簡化版，可動態調控光照、溫度與光暗周期并通過測量OD監測藻類生長動態，非常適用于藻類的多重復快速培養。

左：衣藻野生型和兩種突變株的NPQ曲線、不同培養條件及其生長曲線；右：MC1000 8通道藻類培養監測系統

參考文獻：Berteotti S, et al. 2016. Increased biomass productivity in green algae by tuning non-photochemical quenching. Scientific Reports 6, 21339

8. 海洋生物表型組學光學成像分析系統

2019年中國海洋大學裝備了*套海洋生物表型組學光學成像分析系統，這一系統包含以下子系統：

lFKM多光譜熒光動態顯微成像系統

lFluorCam多光譜熒光成像系統

lFluorCam葉綠素熒光成像系統

lSpecim IQ 高光譜成像儀

lMC1000 8通道藻類培養監測系統

海洋生物表型組學光學成像分析系統的各個子系統

FluorCam多光譜熒光成像系統是FluorCam葉綠素熒光成像技術的高級擴展產品，既可用于葉綠素熒光動態成像分析，又可用于長波段UV紫外光對植物葉片激發產生的MCF多光譜熒光成像測量分析，還可選配綠色熒光蛋白GFP等穩態熒光的成像測量。FluorCam廣泛應用于藻類光合功能基因、逆境脅迫、藻類生態、經濟藻類育種以及生物能源開發等研究。其中，MCF多光譜熒光尤其適用于病害造成的次生代謝組總體分析及藻類防御機制研究。

左：工作中的FluorCam多光譜熒光成像系統；右：紫菜感染病害的MCF多光譜熒光成像分析

FKM（Fluorescence Kinetic Microscope）多光譜熒光動態顯微成像系統是目前功能強大全面的植物顯微熒光研究儀器，是基于FluorCam葉綠素熒光成像技術的顯微成像定制系統。FKM使熒光成像技術真正成為光合作用機理研究的探針，使科研工作者在藻類和高等植物細胞與亞細胞層次深入理解光合作用過程及該過程中發生的各種變化，為直接研究葉綠體中光合系統的工作機理提供了有力的工具。FKM作為藻類/植物表型和基因型顯微研究的雙重利器，得到了學界的廣泛認可并取得了大量的科研成果。FKM與FluorCam多光譜熒光成像系統配合可以全面反映病害等脅迫因素對藻類宏觀和微觀兩個層次的影響。

紫菜病害感染后的葉綠素熒光顯微成像圖：左：大熒光Fm，中：大光化學效率Fv/Fm；1為病害初感染區域，2為病害擴散區域，3為尚未感染區域；右：工作中的FKM系統

? Specim IQ 高光譜成像儀是一款完整的、便攜的、手持式高光譜相機，集高光譜數據采集、分析處理、結果可視化等功能特點于一體。其所需的全部組件均集成在緊湊、輕量級機身上，具備IP等級防護和全自動運行，系統自帶可充電電池和可替換的標準存儲卡。測量得到的高光譜成像圖可以進一步解釋藻類色素組分變化、光照適應、脅迫中后期的色素分解、細胞結構受損等。

左：Specim IQ 高光譜成像儀；右：不同藻類的高光譜成像分析

中國海洋大學希望通過這一系統廣泛開展不同基因型藻類在逆境脅迫下的表型分析研究，從而揭示藻類抗逆適應的機理，為優良經濟藻種開發提供理論依據。目前已經取得了初步的研究成果。

中國海洋大學使用FluorCam多光譜熒光成像系統研究條斑紫菜Pyropia yezoensis感染赤腐病后的次生代謝響應（Tang L, 2019）

參考文獻：Tang L, et al. 2019. Transcriptomic Insights into Innate Immunity Responding to Red Rot Disease in Red Alga Pyropia yezoensis. Int. J. Mol. Sci. 20: 5970

9. AlgaTech藻類高通量表型分析平臺

AlgaTech客戶定制藻類高通量表型分析平臺由樣品自動傳送系統、光譜成像站和分析軟件組成，可選配多光譜成像、高光譜成像、葉綠素熒光成像、多光譜熒光成像等成像工作站，每個工作站可獨立運行，可同步監測藻類光合作用、pH及溫度，還可選配不同類型藻類培養與在線分析系統。