借助于光學顯微鏡,人類可以看到神奇的微觀世界。但是由于阿貝極限的存在,限制了光學顯微鏡的分辨率。
阿貝極限
19世紀末,德國物理學家恩斯特·阿貝指出,光學顯微鏡分辨率的極限,大約是可見光波長的一半??梢姽庵胁ㄩL短的藍紫光波長在400nm左右。因此,如果兩點之間的距離小于200nm,我們將無法分辨出這是兩個點,這就是通常所說的“阿貝極限”。阿貝極限使我們無法更加深入地了解微觀世界。
超分辨率顯微鏡
超分辨率熒光顯微技術借助于一種特殊的熒光分子,從原理上打破了光學遠場衍射極限對光學系統極限分辨率的限制,實現納米級別的分辨率,點亮更加微觀的世界。這種有意思的熒光分子被稱為光開關熒光化合物。常見的超分辨技術有受激發射損耗顯微技術(STED),光激活定位顯微技術(PALM)、光學重構顯微技術(STORM)、可逆熒光轉移技術(RESOLFT)等。超分辨率顯微鏡對于所使用的光開關熒光化合物的光反應量子產率(PQY)有嚴格的要求。
光開關熒光化合物PQY的表征
Masahiro Irie教授團隊報道了一種二芳基乙烯化合物在紫外光和可見光照射下發生的可逆閉環和裂環反應的過程。該研究使用355nm的紫外光打開此化合物的熒光使其處于“ON”狀態,使用488nm的可見光可以關閉化合物的熒光,使其處于“OFF”狀態。作者使用島津的QYM-01*光反應評價系統對開環和裂環過程的光反應量子產率(φoc和φco)進行了測試。QYM-01可以自動測試光反應中吸收的光子數,所得光子數經過NIST功率計校準,可確保準確度,以進一步用于PQY的計算。
超分辨率顯微鏡要求光開關熒光化合物的裂環量子產率在10-2-10-3之間,作者把其中一種裂環量子產率φco為2X10-3的化合物應用在超分辨率顯微鏡RESOLFT上,并得到了相比于傳統的共聚焦顯微鏡(CONFOCAL)分辨率高得多的圖片。
參考文章:
《Photoswitchable Turn-on Mode Fluorescent Diarylethenes Strategies for Controlling the Switching Response》(Bull. Chem. Soc. Jpn. 2018, 91, 237–250)
*QYM-01是島津全新發布的Lightway PQY-01光反應評價系統的前序機型。
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