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- 公司名稱 上海劍鈍生物科技有限公司
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- 型號
- 所在地 上海市
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2017/9/22 8:57:38
- 訪問次數(shù) 652
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上海甲基化檢測實驗外包
DNA甲基化是zui早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一,真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。
上海甲基化檢測實驗外包
上海甲基化檢測實驗外包服務(wù)項目
1、甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為*,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設(shè)計針對甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在甲基化;反之,說明被檢測的位點不存在甲基化。
2、亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為*,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設(shè)計BSP引物進(jìn)行PCR,在擴增過程中*全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶,zui后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測序,可以提高測序成功率,這種方法稱為BSP-克隆測序法。
3、甲基化敏感擴增多態(tài)性(Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)
MSAP是利用對DNA甲基化敏感的兩種同裂酶Hpa II和Msp I來對基因組DNA進(jìn)行酶切和連接。由于兩種酶能夠識別相同的限制性酶切位點,即CCGG位點。當(dāng)DNA序列中的CCGG位點出現(xiàn)不同程度的甲基化狀態(tài)時,會分別被這兩種酶識別,以有無產(chǎn)物的方式體現(xiàn)出來。
4、焦磷酸測序(Pyrosequencing)
通過準(zhǔn)確定量單個連續(xù)的CpG 位點上的甲基化頻率,焦磷酸測序能檢測并定量甲基化水平上的細(xì)微改變。在序列延伸過程中,根據(jù)C和T的摻入量來定量確定單個位點的C-T比例。因此,不同位點的甲基化變異就能被準(zhǔn)確檢測。由于焦磷酸測序提供了真實的序列數(shù)據(jù),甲基化狀態(tài)也就以序列形式呈現(xiàn)。
上海甲基化檢測實驗外包送樣要求
細(xì)胞(≥106個)、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,基因組DNA(體積≥20μl,濃度≥50 ng/μl)。
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