引物設計與合成實驗外包.
引物設計是分子生物學常用技術，引物質量有可以影響實驗質量，利用優化的引物會使實驗取得良好的實驗結果，否則會加大后續的工作量，實驗可能一無所獲。

  引物設計與合成實驗外包.

一、 引物設計與合成實驗外包.原則

聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用zui多，zui廣泛的手段之一，而引物設計是PCR技術中至關重要的一環，使用不合適的PCR引物容易導致實驗失敗：表現為擴增出目的帶之外的多條帶（如形成引物二聚體帶），不出帶或出帶很弱，等等。現在PCR引物設計大都通過計算機軟件進行，可以直接提交模板序列到特定網頁，得到設計好的引物，也可以在本地計算機上運行引物設計專業軟件。引物設計原則如下：

1、引物應在序列的保守區域設計并具有特異性。引物序列應位于基因組DNA的高度保守區，且與非擴增區無同源序列。這樣可以減少引物與基因組的非特異結合，提高反應的特異性；

2、引物的長度一般為15-30 bp。常用的是18-27 bp，但不應大于38，因為過長會導致其延伸溫度大于74℃，不適于Taq DNA聚合酶進行反應；

3、引物不應形成二級結構。引物二聚體及發夾結構的能值過高(超過4.5kcal/mol)易導致產生引物二聚體帶，并且降低引物有效濃度而使PCR反應不能正常進行；

4、引物序列的GC含量一般為40-60%。過高或過低都不利于引發反應。上下游引物的GC含量不能相差太大；

5、引物所對應模板位置序列的Tm值在72℃左右可使復性條件*。Tm值的計算有多種方法，如按公式Tm=4(G+C)+2(A+T)；

6、引物5'端序列對PCR影響不太大，因此常用來引進修飾位點或標記物。可根據下一步實驗中要插入PCR產物的載體的相應序列而確定。

7、引物3'端不可修飾。引物3'端的末位堿基對Taq酶的DNA合成效率有較大的影響。不同的末位堿基在錯配位置導致不同的擴增效率，末位堿基為A的錯配效率明顯高于其他3個堿基，因此應當避免在引物的3'端使用堿基A。

8、引物序列自身或者引物之間不能在出現3個以上的連續堿基，如GGG或CCC，也會使錯誤引發機率增加；

9、G值是指DNA雙鏈形成所需的自由能，該值反映了雙鏈結構內部堿基對的相對穩定性。應當選用3'端 G值較低（值不超過9），而5'端和中間 G值相對較高的引物。引物的3'端的 G值過高，容易在錯配位點形成雙鏈結構并引發DNA聚合反應；

值得一提的是，各種模板的引物設計難度不一。有的模板本身條件比較困難，例如GC含量偏高或偏低，導致找不到各種指標都十分合適的引物；在用作克隆目的的PCR因為產物序列相對固定，引物設計的選擇自由度較低，在這種情況只能退而求其次，盡量去滿足條件。

 引物設計與合成實驗外包.服務特點：

1. 提供引物設計的參考序列，設計原理和分析報告，讓您對您的引物或探針的性能和特點有一個全面的了解，便于您對實驗結果的認識和分析。

2. 可提供擴增前的與處理及擴增后服務：包括，核酸提取，pcr，核酸純化，序列分析，數據統計等服務。             

3. 一次的服務，全程的保障。