HE染色法是石蠟切片技術里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。該染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中zui基本、使用zui廣泛的技術方法
石蠟樣本常溫保存運輸;冰凍切片樣本-20度保存運輸;
一 取材和固定
取材后經固定24小時(4%PA灌注取材的后固定6~8小時)以后,流水沖洗24小時,置于70%~80%乙醇中,可*保存。
二 脫水和包埋
1、95%ALC(二道) Ⅰ 2~4h
Ⅱ 2h
2、無水ALC(二道) Ⅰ 1.5h
Ⅱ 1h
3、二甲苯+無水乙醇(1:1) 20min
4、二甲苯(二道) Ⅰ 10min
(注:脫水透明esp.透明時間可適當延長) Ⅱ 10min
5、浸軟蠟(50~52℃)(二道) Ⅰ 30min
Ⅱ 1h
6、浸硬蠟(58~60℃)(二道) Ⅰ 30min
Ⅱ 30min
7、包埋:注意溫度、切面。
三 切片
修、切、展、貼、烤(烤片55~60℃) 3~10h
四 HE染色
1、二甲苯脫蠟 五道,每道5~10分鐘
2、無水乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
3、95%乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5mn
4、80%乙醇 5min
5、70%乙醇 5min
6、D.W. 3~5min
7、Harris蘇木素液 5min(冬天可適當延長,eg.20min)
8、水洗
9、0.5%鹽酸酒精分色 3~10seconds,鏡下觀察
10、水洗藍化 15~30min(注意換水)
11、70%乙醇 5min
12、80%乙醇 5min
13、伊紅液(95%乙醇溶液) 3~30seconds
14、95%乙醇 Ⅰ 1min
Ⅱ 5min
15、無水乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
16、二甲苯+乙醇(1:1) 5min
17、二甲苯 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
Ⅲ 5min
18、中性樹膠封片。
HE染色注意事項:
1. 染色時調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和*水溶液中處理10-30min,這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2. 切片染蘇木精后,分色這一步是關鍵,應在顯微鏡下控制進行,一般以細胞核染色清楚(晰)而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺,應重新染色后再行分色。
3. 切片經酒精脫水后,入二甲苯時可出現白色不透明狀態,此為脫水不*,應將切片退回*,更換酒精、二甲苯,以求*脫水與透明。
4. 在染色過程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經元形態。
5. 切片從二甲苯取出或進入二甲苯前,切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。
6. zui后封固時,要用中性樹脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會褪色,所用樹脂濃度要適當,樹脂封固時不能有氣泡。
蘇木精—伊紅染色法簡稱HE染色法,它是zui常用的普通染色方法。蘇木精(hematoxylin)是陽離子染料,將細胞核內的嗜堿性物質染成藍紫色。伊紅(eosin)是陰離子染料,將細胞質和膠原纖維等染成粉紅色。
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