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EZ Trans細胞轉染液（Ⅱ）是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體。其轉染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。
EZ Trans細胞轉染液(Ⅱ)產品描述
陽離子聚合物細胞轉染試劑是細胞轉染液(Ⅱ)中的一個重要分支，除具有轉染效率高、適用細胞范圍廣泛等優點外，在體內轉染還避免了脂質體轉染試劑容易導致炎性反應或被血清清除的弊端。李記生物開發的EZ Trans細胞轉染液(Ⅱ)使用新型陽離子聚合物，在保留傳統陽離子聚合物優點同時，有兩個重要改進，一是顯著降低了轉染試劑的細胞毒性；二是顯著提高轉染效率，細胞的適用范圍更廣。經比對試驗，在選用的測試細胞中，轉染效率、細胞毒性均優于大部分市售轉染試劑產品，接近或超過Lipo3000。
EZ Trans(Ⅱ)是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體。其轉染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。
EZ Trans細胞轉染液(Ⅱ)使用方法
1. 接種細胞：用膠原酶消化細胞并計數（不建議用*）。轉染前18-24小時進行細胞的鋪板，以便在轉染時，貼壁細胞的密度大約在80%左右。注：培養液中的血清和抗生素不影響轉染效率。
2. 準備 EZ Trans(Ⅱ)-DNA 復合物
1）轉染前將所有試劑置于室溫10分鐘。下面，以轉染24孔板培養皿為例，說明轉染的具體方法（如果在別的培養器皿中進行轉染，各試劑建議使用量見表1.：
2）將1 μg 質粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基，用移液槍吹吸3-4次。
3）將3 μL EZ Trans轉染液(Ⅱ)稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基，用移液槍吹吸3-4次。
注：無血清的高糖DMEM培養基是稀釋液，不能使用含血清的培養基進行DNA和EZ Trans轉染試劑(Ⅱ)的稀釋！因為EZ Trans(Ⅱ)-DNA轉染復合物的形成過程不能含有血清。
4）將稀釋好的EZ Trans轉染試劑(Ⅱ)一次性全部加入到已稀釋好的質粒DNA中，立即用移液槍吹吸3-4次。
注：此混合的順序不能反向進行！
5）室溫放置10-15分鐘，以形成EZ Trans(Ⅱ)-DNA復合物。
表1：不同培養體積對應的待轉DNA、EZ Trans(Ⅱ)、稀釋液用量
培養器皿 | 培養液體積（mL） | DNA量（μg） | EZ Trans(Ⅱ) (μL) | 稀釋液(μL) |
48孔板 | 0.3 | 0.5 | 1.5 | 2 × 25 |
24孔板 | 0.5 | 1 | 3 | 2 × 40 |
12孔板 | 0.75 | 1.5 | 4.5 | 2 × 60 |
6孔板 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
35 mm培養皿 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
60 mm 培養皿 | 3 | 6 | 18 | 2 × 250 |
100 mm 培養皿 | 9 | 12 | 36 | 2 × 500 |
3. 轉染細胞
1）將上述80μL EZ Trans(Ⅱ)-DNA轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動培養皿或輕微渦旋，讓EZ Trans(Ⅱ)-DNA復合物分散均勻。
2）在 CO2培養箱中 37℃下孵育細胞，轉染后12-18小時，去除含EZ Trans(Ⅱ)-DNA復合物的培養液。（若細胞形態欠佳，可在轉染3-5h后，添加1/2體積的包含30%血清的生長培養基，在轉染12-18小時后*去除含EZ Trans(Ⅱ)-DNA復合物的培養液，用含血清和抗生素的新鮮培養液。）
3）轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達，可根據需要在24-48小時內檢測轉染效率。
注：篩選穩定轉染細胞株，可在上述操作后（轉染細胞24小時后），將細胞傳代至新鮮的生長培養基中（將細胞稀釋10倍以上），在CO2培養箱中 37℃孵育過夜。在有轉染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。
EZ Trans細胞轉染液(Ⅱ)運輸與保存方法
常溫運輸，4℃保存，保質期12個月。
使用注意事項
質粒質量：請務必使用高質量轉染級無內毒素質粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260nm / 280nm比值確定 DNA 純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。
細胞條件：使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養細胞。
特別提醒
1. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70～80%。
2. 對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。
3. 即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-EZ Trans(Ⅱ)復合物仍能轉染細胞，但是DNA-EZ Trans(Ⅱ)復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。
4. 對大多數細胞來而言，每 1μg DNA 使用 3.0μL EZ Trans(Ⅱ)試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每 1μg DNA使用 1～4μL體積線性EZ Trans轉染試劑(Ⅱ)進行優化。
EZ Trans(Ⅱ)轉染液用于不同細胞轉染時用量參考（以96孔板為例）
細胞型號 | 培養基 | 每孔細胞數 | DNA的量 | 轉染試劑量 |
293H | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
293FT | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
293E | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
293F | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
COS7 | DMEM | 1.5×104 | 0.4µg | 0.5µL |
hela | DMEM | 2×104 | 0.3µg | 0.5µL |
Caco2 | MEM | 3.5×104 | 0.3µg | 0.75µL |
BHK21 | MEM | 2×104 | 0.2µg | 0.5µL |
CHO-DG44 | DMEM+HT+pro | 2×104 | 0.5µg | 0.5µL |
RAW264.7 | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
MCF7 | MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat | 2×104 | 0.1µg | 0.25µL |
SW480 | IMDM | 3×104 | 0.4µg | 0.5µL |
MDCK | DMEM | 4×104 | 0.6µg | 1µL |
CHO-K1 | IMDM+Pro | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
HepG2 | DMEM | 3×104 | 0.5µg | 0.75µL |
A549 | DMEM | 2×104 | 0.3µg | 0.5µL |
NIH/3T3 | DMEM | 1.5×104 | 0.1µg | 0.75µL |
vero | DMEM | 3×104 | 0.3µg | 0.75µL |
sf9 | SIM SF | 5×104 | 0.4µg | 0.75µL |
附：幾種細胞轉染方法比較
轉染方法 | 原理 | 主要應用 | 特點 |
陽離子聚合物 | 帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細胞。 | 穩定轉染 瞬時轉染 所有細胞 | 除了具有陽離子脂質體的轉染效率高，操作簡單，適用范圍廣，重復性好等特點外，還具有在體內，轉染效率高，細胞毒性低等特點，是新一代的轉染試劑。 |
陽離子脂質體法 | 帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，然后脂質體上剩余的電核與細胞膜上的唾液酸殘基的負電核結合；另一種解釋是通過細胞是內吞作用而被進入細胞。(若DNA濃度過高，中和脂質體表面電核，而降低了與細胞的結合能力) | 穩定轉染 瞬時轉染 所有細胞 | 使用方法簡單，可攜帶大片段DNA，通用于各種類型的裸露DNA或RNA，能轉染各種類型的細胞，沒有免疫原性。雖在體外基因轉染 中有很高的效率，但在體內，能被血清清除，并在肺組織內累積，誘發強烈的抗炎反應，導致高水平的毒性，這在很大程度上限制了 其應用 |
DEAE-葡聚糖法 | 帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞 | 瞬時轉染 | 相對簡便、重復比磷酸鈣好,但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS 細胞系 |
磷酸鈣法 | 磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞 | 穩定轉染 染瞬轉染 | 不適用于原代細胞（所需的DNA濃度較高）,操作簡便但重復性差,有些細胞不適用細胞建議用CSCL梯度離心，轉染是拷貝數較多 |
逆轉錄病毒(RNA) | 通過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用而進入宿主細胞，之后反轉入酶啟動合成DNA并隨機整合到宿主基因組中 | 穩定轉染 特定宿主細胞 | 可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等,但攜帶基因不能太大（<8kb）, 細胞需處分裂期,需考慮安全因素 |
腺病毒 (雙鏈 DNA) | 先和細胞表面的受體結合，繼而在αv整合素介導下被細胞內吞 | 瞬時轉染 特定宿主細胞 | 可用于難轉染的細胞,需考慮安全因素 |
Biolistic顆粒傳遞法 （基因槍粒子轟擊法） | 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內逐步釋放，表達 | 瞬時性轉染 穩定轉染 | 可用于：人的表皮細胞， 纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞 |
顯微注射法 | 用顯微操作將 DNA直接注入靶 細胞核 | 穩定轉染 瞬時轉染 | 轉染細胞數有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞 |
電穿孔法 | 高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入 | 穩定轉染 瞬時轉染 所有細胞 | 適用性廣，除了質粒外，還可轉染大的基因組 （>65kb）但細胞致死率高， DNA和細胞用量大， 需根據不同細胞類型優化電穿孔實驗條件，拷貝數較少1-20 |
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